【摘要】目的:研究抑癌基因p53和增殖細(xì)胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)在子宮頸癌中的表達(dá)特點(diǎn)，并探討其與病理分級(jí)的關(guān)系。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)ElivisionTM二步法檢測(cè)35例宮頸癌及30例正常宮頸組織中p53及PCNA的表達(dá)情況，并結(jié)合病理分級(jí)進(jìn)行分析。結(jié)果:①P53蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)率為85.71%(30/35)，明顯高于在正常宮頸組織中的表達(dá)率6.67%(2/30)，P=0.001;②P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸癌組織的病理學(xué)分級(jí)有關(guān)，P53在宮頸癌Ⅰ級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)率57.14%(8/14)明顯低于Ⅱ級(jí)86.67%(13/15)和Ⅲ級(jí)100.0%(6/6)，P<0.05;③宮頸癌組織PCNA陽(yáng)性表達(dá)率Ⅰ級(jí)64.29%明顯低于Ⅱ級(jí)93.33%和Ⅲ級(jí)100.0%,P<0.05。結(jié)論p53基因突變?cè)趯m頸鱗癌發(fā)生中起重要作用，p53及PCNA檢測(cè)對(duì)于研究宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展和評(píng)估子宮頸癌惡性程度具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】抑癌基因p53;PCNA;宮頸癌;免疫組織化學(xué)

宮頸癌是嚴(yán)重危害婦女健康的常見(jiàn)惡性腫瘤之一，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位。國(guó)內(nèi)外大量研究顯示，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后與腫瘤抑制基因p53和增生細(xì)胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)活性密切相關(guān)^①②。目前有關(guān)p53基因及PCNA表達(dá)在子宮頸癌中的改變研究較少，我們通過(guò)對(duì)子宮頸癌組織和正常子宮頸組織中p53基因及PCNA表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討二者與宮頸癌的關(guān)系及臨床病理意義。

1、資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源實(shí)驗(yàn)組收集2001年1月—2008年12月我院病理科存檔的原發(fā)性宮頸癌石蠟包埋標(biāo)本共35例，其中宮頸鱗癌30例，宮頸腺癌5例。年齡在28～72歲，平均年齡49.1歲，中位年齡50.2歲，病理組織學(xué)分級(jí)按WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級(jí)14例，Ⅱ級(jí)15例,Ⅲ級(jí)6例;所有患者術(shù)前均未經(jīng)放射線及化學(xué)藥物治療。對(duì)照組選取30例正常宮頸組織，來(lái)源于同期存檔的因子宮肌瘤手術(shù)切除的宮頸標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)所用組織均經(jīng)過(guò)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)HE切片，經(jīng)病理學(xué)確診后，連續(xù)4μm切片備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 采用ElivisionTM二步法，具體步驟按說(shuō)明書進(jìn)行。單克隆PCNA抗體購(gòu)于北京中山公司，p53抗體福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，DAB顯色，蘇木精復(fù)染;以TBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定^① P53蛋白陽(yáng)性定位主要在細(xì)胞核，也可定位在細(xì)胞質(zhì)，胞核出現(xiàn)棕黃色為染色陽(yáng)性細(xì)胞。按1996年全國(guó)免疫組化技術(shù)與診斷標(biāo)準(zhǔn)化專題研討會(huì)意見(jiàn)，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%為陰性(-)、25%～50%為弱陽(yáng)性(+)、50%～70%為陽(yáng)性(++)、>70%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。具體依染色細(xì)胞數(shù)及強(qiáng)弱分類，陰性(-)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%，染色較淡;陽(yáng)性(+～+++)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>25%或>50%，染色較強(qiáng)、清晰。②PCNA陽(yáng)性定位于細(xì)胞核，胞核出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(8.01版本)，單向有序資料采用秩和檢驗(yàn)，率的比較用χ2檢驗(yàn)。

2、結(jié)果

2.1 P53蛋白在宮頸癌組織的表達(dá)率 分別為85.71%(30/35)，明顯高于在正常宮頸組織中的表達(dá)率6.67%(2/30)，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2=11.814，P=0.001。

2.2 P53蛋白表達(dá)與宮頸癌分級(jí)的關(guān)系 隨著宮頸癌病理學(xué)分級(jí)的升高P53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率增高，Hc=5.4731，P=0.0193,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

P53蛋白表達(dá)與宮頸癌分級(jí)的關(guān)系分級(jí)n陽(yáng)性陰性陽(yáng)性率(%)Ⅰ級(jí)148657.14Ⅱ級(jí)1513286.67Ⅲ級(jí)660100.00

2.3 PCNA表達(dá)與宮頸癌分級(jí)的關(guān)系 PCNA陽(yáng)性率隨宮頸癌級(jí)別升高而增高，Hc=5.7087,P=0.0221,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

PCNA表達(dá)與宮頸癌分級(jí)的關(guān)系分級(jí)n陽(yáng)性陰性陽(yáng)性率(%)]Ⅰ級(jí)149564.29Ⅱ級(jí)1514193.33Ⅲ級(jí)660100.00

3、討論

目前認(rèn)為，細(xì)胞癌變?cè)诨蛩缴系淖兓?，一方面是癌基因的激活，另一方面是抑癌基因的失活。p53分為野生型和突變型，野生型p53是抑癌基因，對(duì)于維持細(xì)胞基因組的完整性、DNA損傷的修復(fù)及細(xì)胞周圍的正常運(yùn)行均起重要作用，對(duì)細(xì)胞的增殖起負(fù)性調(diào)控作用，它的蛋白表達(dá)產(chǎn)物很不穩(wěn)定，不能被免疫組化檢測(cè)到。突變型p53是癌基因，它的蛋白表達(dá)產(chǎn)物能被免疫組化檢測(cè)到。我們研究的p53都是突變型。有文獻(xiàn)報(bào)道^③，在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，突變型和野生型p53的比例是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞增殖的重要因素，如果當(dāng)突變型p53大于野生型p5310倍時(shí)，細(xì)胞可能發(fā)生轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致癌變。在本研究中，p53在正常組和癌癥組中的表達(dá)是有差異的(χ2=11.814，P<0.001)，p53與病理分級(jí)有正相關(guān)關(guān)系，表現(xiàn)為隨著p53表達(dá)的增強(qiáng)，病理分級(jí)也逐步增高，說(shuō)明了野生型p53的減弱表達(dá)、突變型p53的過(guò)表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。

PCNA是存在于細(xì)胞核中能影響細(xì)胞增殖的一種蛋白質(zhì)，為細(xì)胞增生及DNA合成所必需，是反映細(xì)胞增殖活性的重要標(biāo)志之一^④。細(xì)胞增殖能力愈強(qiáng)，細(xì)胞周期紊亂愈重。細(xì)胞增殖失控和異常增殖將導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。腫瘤細(xì)胞的增殖情況與腫瘤組織的分化狀態(tài)、侵襲能力以及預(yù)后密切相關(guān)。有研究報(bào)道，PCNA不僅可反映腫瘤細(xì)胞的增生能力，而且還與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān)^⑤⑥⑦。我們的研究結(jié)果顯示，子宮頸癌組織PCNA陽(yáng)性指數(shù)顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，而且隨病理分級(jí)的增高而顯著升高(P<0.05)。這提示PCNA的表達(dá)可以反映細(xì)胞所處的周期時(shí)相及細(xì)胞的分化程度。腫瘤分化程度越低，增殖活性越強(qiáng)，PCNA指數(shù)越高，腫瘤的浸潤(rùn)能力和轉(zhuǎn)移能力越強(qiáng)，臨床預(yù)后越差。因此，PCNA的表達(dá)水平可比較客觀地反映宮頸癌細(xì)胞的惡性程度及其所處的生長(zhǎng)狀態(tài)，可作為臨床醫(yī)生判斷宮頸癌惡性程度的一個(gè)分子生物學(xué)指標(biāo)。

綜上所述，宮頸癌的發(fā)生受多基因調(diào)控，其中p53基因及其表達(dá)產(chǎn)物P53蛋白高表達(dá)共同存在于宮頸癌中，p53基因高表達(dá)缺失以及PCNA的表達(dá)上調(diào)參與了宮頸癌的演進(jìn)過(guò)程。對(duì)宮頸病變做p53表達(dá)及PCNA指數(shù)檢測(cè)，作為了解病變生物學(xué)信息的窗口，對(duì)于子宮頸良惡性病變的診斷、子宮頸癌病理分級(jí)及臨床預(yù)后的判斷都具有重要的臨床意義。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 劉凌，程惠敏.宮頸鱗癌放療前后病理組織學(xué)、細(xì)胞凋亡、增殖細(xì)胞核抗原及p53的變化[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,28(3): 148-150.

[2] 卞繼峰，于修平，董杰德，等.乳頭瘤病毒16 型E6,P53,RB,PCNA 在宮頸癌中的表達(dá)狀態(tài)及相關(guān)性[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，1997，11(3 ):271-273.

[3] Yang YC ,Chang CL,Kast WM.Effects of P53 on the immune system : implication for cancer immunotherapy[J].Leukemia ,2001,51(3):197-201.

[4] 黃杰雄，黃致治.細(xì)胞增殖核抗原的研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)生理病理學(xué)與臨床分冊(cè),1994,14(1):9-11.

[5] 曹永成，耿明，鄭金鋒，等.P16、P15及PCNA在子宮頸癌中的表達(dá)及臨床病理意義[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2008，16(4):21-22.

[6] 王波,楊志宏,殷新光,等.P53蛋白、PCNA在胃癌中表達(dá)及其生物學(xué)行為關(guān)系的研究[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2003,17 (4):274.

[7] 劉穎，林新生，劉慧.細(xì)胞凋亡和P53 、PCNA 表達(dá)在宮頸癌的研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2004，9(5):461-463.