【關(guān)鍵詞】子宮腺肌病;子宮內(nèi)膜;誘生型一氧化氮合酶;免疫組織化學(xué)

子宮腺肌病是婦科常見病，以在子宮肌壁內(nèi)出現(xiàn)子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)為其病變征，此病多發(fā)生于30～50歲經(jīng)產(chǎn)婦，臨床上往往以子宮增大、痛經(jīng)和月經(jīng)過(guò)多為其主要癥狀。近年來(lái)對(duì)該病的發(fā)生機(jī)制提出一些新的看法，關(guān)于血管生成、免疫等方面的異常在子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。子宮內(nèi)膜侵入子宮肌層后，血管生成活性的增強(qiáng)，為異位內(nèi)膜的種植生成提供了有利條件。NO可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞^①的分裂增生，調(diào)節(jié)血管生成及血流量，由此推測(cè)可在子宮腺肌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。所以本研究用免疫組化的方法，測(cè)定子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜誘導(dǎo)型一氧化氯合酶(iNOS)的含量，旨在探討其在子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所起的作用和意義，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1、資料與方法

1.1 標(biāo)本 來(lái)源材料均取本院2006年9月—2008年3月手術(shù)切除并有完整臨床資料的子宮標(biāo)本，腺肌病組:子宮腺肌病38例，患者年齡35～49歲，平均年齡38.9歲;子宮內(nèi)膜組織學(xué)分期:增生期20例，分泌期18例。肌瘤組:無(wú)癥狀子宮肌瘤31例，38～51歲，平均年齡43.2歲;子宮內(nèi)膜組織學(xué)分期:增生期17例，分泌期14例兩組患者術(shù)前3個(gè)月內(nèi)均未服用任何激素類藥物。所有病例均行子宮全切或次全切除術(shù)，并經(jīng)病理診斷證實(shí)。即用型SABC免疫組織化學(xué)染色試劑盒(產(chǎn)品編號(hào):SA1022)為武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法 石蠟切片常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，PBS液洗5min,3%H2O25min,PBS洗5min;10%山羊血清室溫10min;一抗(1∶50)，冰箱4℃過(guò)夜，PBS洗5min;二抗(1∶150)37℃溫箱30min,PBS洗5min;SABC30min,PBS洗5min;DAB顯色5min,自來(lái)水沖洗;蘇木素復(fù)染，脫水透明，封片。

1.3 結(jié)果 判定結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)^②以細(xì)胞漿出現(xiàn)黃色顆粒為陽(yáng)性，表達(dá)強(qiáng)度用組織學(xué)評(píng)分表示。組織學(xué)評(píng)分為ΣPi，其中i代表細(xì)胞漿染色強(qiáng)度，分為4級(jí):0級(jí)無(wú)黃色顆粒，1級(jí)為淡黃色顆粒，2級(jí)為黃色顆粒，3級(jí)為棕色顆粒;P代表同一染色強(qiáng)度細(xì)胞所占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，1、2、3、4、5分別代表染色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)的0%～15%、16%～50%、51%～85%、86%～95%、96%～100%。每張切片隨機(jī)測(cè)定5個(gè)高倍鏡視野(200倍)的染色強(qiáng)度，取5個(gè)視野的組織學(xué)評(píng)分均值作為最終得分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用x±s表示，采用方差分析和兩兩比較t檢驗(yàn)，P<0.05為有顯著性差異。

2、結(jié)果

iNOS在正常或異位內(nèi)膜腺上皮都有陽(yáng)性表達(dá)，兩組的血管平滑肌也有陽(yáng)性表達(dá)，而在間質(zhì)細(xì)胞及子宮平滑肌細(xì)胞均未見陽(yáng)性表達(dá)。

2.1 腺肌病組在位子宮內(nèi)膜與肌瘤組子宮內(nèi)膜iNOS組織學(xué)評(píng)分比較 腺肌病組增殖期或分泌期子宮內(nèi)膜與肌瘤組比較，腺上皮iNOS組織學(xué)評(píng)分無(wú)明顯變化，兩組比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。同時(shí)，兩組子宮內(nèi)膜腺上皮的增殖期和分泌期iNOS組織學(xué)評(píng)分比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)，即無(wú)周期性變化，兩組患者正常內(nèi)膜、異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞iNOS組織學(xué)評(píng)分比較注:*與肌瘤組正常內(nèi)膜比較，P>0.05，▲與在位內(nèi)膜比較，P<0.05，△與同組增殖期比較P>0.05

2.2 腺肌病組在位內(nèi)膜與異位內(nèi)膜iNOS組織學(xué)評(píng)分比較 腺肌病組增殖期或分泌期異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞iNOS組織學(xué)評(píng)分均較在位內(nèi)膜顯著增加，兩者比較，差異有顯著性(P<0.05)。異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜各組內(nèi)增殖期和分泌期比較均無(wú)明顯差別，即無(wú)周期性變化。兩者比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)。

2.3 腺肌病組與肌瘤組血管平滑肌iNOS組織學(xué)評(píng)分比較 腺肌病組血管平滑肌細(xì)胞iNOS組織學(xué)評(píng)分(8.6±1.3)較肌瘤組血管平滑肌細(xì)胞iNOS組織學(xué)評(píng)分(3.5±1.4)顯著增加，兩者比較，差異有顯著性(P<0.05)。

3、討論

內(nèi)源性NO是由一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)以L 精氨酸為底物，在還原型輔酶Ⅱ(NADPH)存在下生成，催化該反應(yīng)的NOS有兩種同工酶，即結(jié)構(gòu)型NOS(constitutiveNOS,cNOS)和誘生型NOS(inducibleNOS,iNOS),前者合成的NO含量很小，主要參與人體的正常生理活動(dòng)，主要存在與內(nèi)皮細(xì)胞，神經(jīng)原細(xì)胞，腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞和血小板等。機(jī)體內(nèi)iNOS催化產(chǎn)生大量NO主要參與機(jī)體的病理生理過(guò)程，本研究結(jié)果顯示，腺肌病患者在位子宮內(nèi)膜與子宮肌瘤患者子宮內(nèi)膜iNOS的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)明顯差異，均無(wú)周期性變化。腺肌病患者異位內(nèi)膜iNOS的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于其在位內(nèi)膜。另外Schindl等^①研究發(fā)現(xiàn)在子宮腺肌病中，在位內(nèi)膜微血管密度與正常內(nèi)膜間無(wú)差異，而異位內(nèi)膜則高于在位內(nèi)膜和正常內(nèi)膜，且在月經(jīng)周期中無(wú)改變，與本研究結(jié)果一致，說(shuō)明子宮內(nèi)膜在侵入子宮肌層后，血管生成活性增強(qiáng)。

另外本研究結(jié)果顯示，在腺肌病組，血管平滑肌iNOS表達(dá)強(qiáng)度高于肌瘤組，表明NO還通過(guò)血管擴(kuò)張作用，增加血流量，為異位內(nèi)膜種植提供條件。子宮內(nèi)膜異位種植后，由于生理特性的改變^③，可通過(guò)自分泌細(xì)胞因子誘導(dǎo)iNOS產(chǎn)生增強(qiáng)而調(diào)節(jié)NO的合成。楊丹等^④的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，雌激素與ER結(jié)合后，可能通過(guò)增加血管平滑肌細(xì)胞的iNOS的活性和蛋白的表達(dá)，促進(jìn)其生成和釋放NO增加。另外，NO可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂、增生，調(diào)節(jié)血管形成為異位內(nèi)膜的形成創(chuàng)造條件。沒(méi)有NO，生長(zhǎng)中的腫瘤大小會(huì)因血供缺乏而受到限制^⑤，也從另一方面提示了血管生成在腺肌病中的重要作用?？傊谙偌〔〉陌l(fā)病過(guò)程中，異位內(nèi)膜iNOS的高表達(dá)，致使NO合成量增加，血管擴(kuò)張，并利于血管形成，增加血流量，為子宮內(nèi)膜的異位種植和生長(zhǎng)提供了有利條件。

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